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梯度實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的問(wèn)題與解決方案
點(diǎn)擊次數(shù)：2076 發(fā)布時(shí)間：2019-09-18
梯度實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的問(wèn)題與解決方案
*，做HPLC分析時(shí)梯度系統(tǒng)可以在縮短分析時(shí)間的同時(shí)而不影響樣品的分離，但是簡(jiǎn)便的同時(shí)也伴隨著多種多樣的問(wèn)題，就筆者個(gè)人總結(jié)，常見(jiàn)的問(wèn)題有三點(diǎn)：
（1）兩相混合后產(chǎn)生氣泡
緩沖鹽溶液與純甲醇走梯度產(chǎn)生的氣泡圖，對(duì)此我們公司通常的解決方法是使用“反壓調(diào)節(jié)器”使紫外檢測(cè)池有一定的壓力，阻止氣泡形成。其次通常我們不建議使用純的有機(jī)相如純甲醇，純乙腈作流動(dòng)相。
（2）梯度基線漂移問(wèn)題
此問(wèn)題一般發(fā)生在梯度線形變化的時(shí)候，而在低波長(zhǎng)下基本不可避免。因?yàn)樯V常用的甲醇和乙腈在低波長(zhǎng)（如210nm）下是有吸收的，如果基線隨著有機(jī)相不斷增多而上漂或者隨著有機(jī)相的不斷減少而下漂，這不僅是正常現(xiàn)象，還反映了系統(tǒng)的靈敏性和性。所以這個(gè)問(wèn)題無(wú)法消除，只能通過(guò)選擇更的有機(jī)溶劑來(lái)降低基線漂移的程度，如乙腈的工業(yè)污染物為丙酮（有的紫外吸收），選擇更的乙腈可以地降低梯度漂移的程度。
（3）梯度鬼峰
這個(gè)問(wèn)題可以一分為二，梯度鬼峰有偶然情況和必然情況兩種。
偶然情況為流動(dòng)相未經(jīng)良好脫氣，溶解氧能與某些有機(jī)溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物，而出現(xiàn)的吸收，此種情況沒(méi)有重復(fù)性，可以通過(guò)良好的流動(dòng)相脫氣而避免。
可能還有些問(wèn)題這里未能總結(jié)，得通過(guò)化學(xué)工作者不斷去發(fā)現(xiàn)和總結(jié)，遇到問(wèn)題解決問(wèn)題是化學(xué)工作者的基本工作，實(shí)事求是是化學(xué)工作的基本要求。
必然情況即隨著梯度運(yùn)行形成一些莫名其妙的峰，并且有*的重復(fù)性，不可避免，一般發(fā)生在梯度有大的變化的時(shí)候。遇到這樣的情況不要擔(dān)心，做一個(gè)梯度空白對(duì)照，只要梯度鬼峰不影響樣品的出峰即可。
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